Plasmide Double Nickase (h) Ankyrin-1: sc-402403-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Ankyrin-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Ankyrin-1 Double Nickase (h) et le plasmide Ankyrin-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ANK1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Ankyrin-1 Antibody (8C3): sc-12733
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Ankyrin-1 | sc-402403-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Ankyrin-1 | sc-402403-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ANK1 humain code l’ankyrine‑1, une protéine adaptatrice qui organise des microdomaines membranaires en reliant des protéines membranaires intégrales au cytosquelette spectrine–actine. Dans les cellules érythroïdes, elle stabilise la membrane des globules rouges grâce à des interactions avec la spectrine et la protéine band 3, contribuant au maintien de la forme cellulaire, à la résistance mécanique et au trafic des protéines membranaires. La fonction d’ANK1 est étroitement liée au remodelage du cytosquelette et aux voies de stabilité membranaire qui régissent la déformabilité et le transport ionique. Une altération génétique ou une expression modifiée d’ANK1 est associée à des troubles de la membrane des hématies, tels que la sphérocytose héréditaire et des phénotypes hémolytiques apparentés, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de l’intégrité membranaire liée au cytosquelette.
Ankyrin-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ANK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ANK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ANK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ANK1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.