Plasmide CRISPR d'Activation (h) ANKS6: sc-406150-ACT

ANKS6 (ankyrin repeat and sterile alpha motif domain containing 6) code une protéine de type échafaudage impliquée dans la biologie du cil primaire et dans des processus associés au centrosome qui coordonnent la polarité épithéliale et la morphogenèse tissulaire. Il a été relié à des mécanismes de ciliopathie de type néphronophtise, notamment via la régulation de voies de signalisation ciliaires intégrant des signaux de développement et des entrées mécanosensorielles. ANKS6 participe à des réseaux d’interactions protéine–protéine grâce à ses répétitions ankyrine et à un assemblage médié par le domaine SAM, ce qui en fait une cible d’étude pour le trafic ciliaire, la coordination du cycle cellulaire et la polarité planaire. La dérégulation ou la perte de fonction d’ANKS6 est associée à des anomalies du développement rénal et à des phénotypes de reins kystiques, ce qui le rend pertinent pour l’étude des ciliopathies et de la biologie des maladies rénales.

ANKS6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANKS6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ANKS6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANKS6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANKS6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ANKS6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANKS6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ANKS6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ANKS6 dans les cellules tumorales présentant une expression de ANKS6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.