ANKRA CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417372

概要

ANKRA2（ankyrin repeat family A member 2）はANKRAをコードしており、ANKRAはアンキリンリピートを含むタンパク質で、遺伝子制御やシグナル伝達過程に影響を与えるタンパク質間相互作用ネットワークを支える役割を担うと考えられています。アンキリンリピートタンパク質は一般に、転写関連またはクロマチン関連複合体の形成に関与し、経路構成因子の安定性や局在を調節し得ます。ヒト細胞では、ANKRA2は分化やストレス応答性の制御といった細胞恒常性プログラムの文脈で研究されており、足場（スキャフォールド）的な因子がシグナル出力を微調整する仕組みの理解に用いられています。アンキリンリピート含有タンパク質の制御異常は、疾患生物学に関連する転写制御の破綻や細胞状態の変化と広く関連づけられていることから、ANKRA2の機能機構を明らかにする研究が動機づけられています。

ANKRA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるANKRA2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ANKRA2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ANKRA2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ANKRAタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ANKRAシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ANKRA2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ANKRAの機能に不可欠なANKRA2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ANKRA2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ANKRA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびANKRA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ANKRA2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ANKRA HDRプラスミド（h）および ANKRA HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはANKRA2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のANKRA2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。