Angiotensinogen CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419047

概要

マウスのAgtはアンジオテンシノーゲンをコードしており、肝臓由来の分泌性糖タンパク質として、レニン―アンジオテンシン系（RAS）におけるアンジオテンシンペプチドの前駆体となります。レニンおよびアンジオテンシン変換酵素によるタンパク質分解処理により、生理活性をもつアンジオテンシンが生成され、腎臓、副腎、心臓、脳にわたって、血管緊張、ナトリウム・体液恒常性、内分泌シグナル伝達を調節します。アンジオテンシノーゲンを介したRAS活性は炎症や酸化ストレス経路とも交差し、アンジオテンシンIIシグナルを通じて組織リモデリングや線維化にも影響します。Agtの発現やプロセシングの破綻は、マウスモデルにおける心血管・腎病態生理、代謝ストレス応答、臓器間クロストークを研究するための機序解明の切り口として広く用いられています。

Angiotensinogen CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAgt遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Agt内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Agtのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Angiotensinogenタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Angiotensinogenシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Agt欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Angiotensinogenの機能に不可欠なAgtエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Agtゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Angiotensinogen CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAngiotensinogen CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Agt遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Angiotensinogen HDRプラスミド（m）および Angiotensinogen HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAgtホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAgt標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。