ANG III CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419105

Übersicht

Maus-Ang3 kodiert Angiopoietin‑3 (ANG III), einen sezernierten Liganden der TEK/TIE2‑Rezeptor-Tyrosinkinase, die die Gefäßentwicklung und die Homöostase des Endothels reguliert. ANG III ist an der Angiopoietin‑TIE‑Signalübertragung beteiligt, die gemeinsam mit VEGF‑abhängigen Signalen das Überleben von Endothelzellen, die Gefäßreifung, die Permeabilität und den Umbau von Blutgefäßen koordiniert. Eine veränderte Aktivität des Angiopoietin‑Signalwegs steht mit dysregulierter Angiogenese und entzündlichen Gefäßreaktionen in Zusammenhang, was für Studien zur Tumorvaskularisierung, zu ischämischen Schäden und zu Mechanismen retinovaskulärer Erkrankungen relevant ist. Als kontextabhängiger Modulator endothelialer Signalwege stellt Ang3 einen gut untersuchbaren Ansatzpunkt dar, um die mikroumgebungsabhängige Kontrolle von Gefäßstabilität und Gewebeperfusion in Mausmodellen zu analysieren.

Das ANG III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ang3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ang3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ang3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ANG III-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ang3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ANG III-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ang3-Exone abzielen, die für die ANG III-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ang3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ANG III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ANG III CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ang3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ANG III HDR-Plasmid (m) und ANG III HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ang3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ang3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.