AMPKβ2 Double Nickase Plasmid (h): sc-403537-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AMPKβ2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AMPKβ2 Double-Nickase-Plasmid (h) und AMPKβ2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PRKAB2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: AMPKβ2: sc-376752
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AMPKβ2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403537-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AMPKβ2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403537-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKAB2 kodiert die β2‑regulatorische Untereinheit der AMP‑aktivierten Proteinkinase (AMPK), einem zentralen Energiesensor, der zelluläre Reaktionen auf Nährstoffverfügbarkeit und energetischen Stress koordiniert. AMPKβ2 trägt als Gerüstprotein zur Anordnung der katalytischen α‑ und der regulatorischen γ‑Untereinheiten bei und unterstützt die Stabilität des Komplexes, seine subzelluläre Lokalisation sowie die Substratauswahl. Dadurch beeinflusst es Signalwege, die die Glukoseaufnahme, die Fettsäureoxidation, die Autophagie und die Hemmung anaboler Signalgebung über mTORC1 steuern. Über diese Funktionen ist AMPKβ2 an der Aufrechterhaltung der metabolischen Homöostase in verschiedenen Geweben beteiligt und prägt adaptive Programme bei Hypoxie, mitochondrialem Stress und trainingsähnlicher Signalgebung. Eine Fehlregulation der AMPK‑Signalübertragung, einschließlich veränderter PRKAB2‑assoziierter Aktivität, wurde mit Phänotypen metabolischer Erkrankungen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext des Stoffwechsels und der Stresstoleranz von Krebszellen untersucht.
AMPKβ2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PRKAB2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PRKAB2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PRKAB2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PRKAB2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.