AMDHD2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-434174

概要

Amdhd2は、アミドヒドロラーゼドメイン含有2（AMDHD2）をコードしており、細胞質に局在する金属依存性脱アセチル化酵素です。AMDHD2は、N-アセチルグルコサミン（GlcNAc）の利用に関わる脱アセチル化反応を触媒することで、アミノ糖代謝に関与します。グルコサミン由来の中間体の処理における役割を通じて、AMDHD2は細胞の栄養感知やヘキソサミンフラックスに関連する経路に影響し得ます。ヘキソサミンフラックスは、糖鎖付加能や代謝恒常性とも交差します。アミノ糖代謝の制御異常は、哺乳類細胞における増殖、ストレス応答、分化プログラムの変化と関連づけられています。マウスモデルでは、Amdhd2の機能を攪乱することにより、GlcNAc関連代謝が組織の生理や疾患に関連する代謝表現型にどのように寄与するかを研究するための遺伝学的な足がかりが得られます。

AMDHD2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAmdhd2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Amdhd2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Amdhd2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AMDHD2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AMDHD2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Amdhd2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AMDHD2の機能に不可欠なAmdhd2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Amdhd2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AMDHD2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAMDHD2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Amdhd2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AMDHD2 HDRプラスミド（m）および AMDHD2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAmdhd2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAmdhd2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。