Plasmide CRISPR d'Activation (h) ALPPL2: sc-401492-ACT

ALPPL2 code pour la phosphatase alcaline de type placentaire 2, une ectoenzyme ancrée à la surface cellulaire par un glycosylphosphatidylinositol (GPI), exprimée à la membrane plasmique où elle hydrolyse des monoesters phosphatés et peut moduler la disponibilité extracellulaire des nucléotides et des phosphates. Par sa localisation membranaire et son activité enzymatique, ALPPL2 est associée à des processus tels que la différenciation épithéliale, l’organisation des microdomaines membranaires et la régulation des environnements de signalisation à la membrane plasmique. Une expression altérée des phosphatases alcalines de type placentaire a été rapportée dans des contextes de transformation cellulaire et de changements d’état de lignée, ce qui étaye l’utilisation d’ALPPL2 comme marqueur fonctionnel dans les études de biologie tumorale et d’identité cellulaire. Son profil d’expression physiologique restreint, par rapport aux phosphatases alcalines ubiquitaires, fait d’ALPPL2 une cible pertinente pour étudier les programmes d’expression d’antigènes associés au cancer et le remodelage du milieu extracellulaire dépendant des phosphatases.

ALPPL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ALPPL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ALPPL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ALPPL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ALPPL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ALPPL2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ALPPL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ALPPL2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ALPPL2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ALPPL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.