ALKBH6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407122

概要

ALKBH6は、Fe(II)/2-オキソグルタル酸依存性ジオキシゲナーゼであるAlkBファミリーの一員をコードしており、このタンパク質群は核酸や関連代謝物に対する酸化的脱メチル化反応で最もよく知られています。ALKBH6は他のALKBHパラログと比べて機能解析が十分ではないものの、アルキル化ストレスに対する細胞応答、ゲノム完全性の維持、ならびに核酸修飾に関連するプロセスの制御という観点から研究されています。AlkB経路の構成要素の制御異常は、がんやその他のゲノム不安定性に関連する病態において、変異負荷、複製ストレス、RNA/DNA修飾ランドスケープの変化との関連がしばしば検討されています。ALKBH6の摂動モデルは、DNA損傷応答シグナル伝達、修復経路の選択、ならびにその下流に生じる転写的またはエピトランスクリプトミクス的影響の機序解明研究を支えます。

ALKBH6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるALKBH6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ALKBH6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ALKBH6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ALKBH6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ALKBH6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ALKBH6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ALKBH6の機能に不可欠なALKBH6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ALKBH6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ALKBH6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびALKBH6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ALKBH6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ALKBH6 HDRプラスミド（h）および ALKBH6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはALKBH6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のALKBH6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。