Plasmide Double Nickase (m) ALKBH5: sc-435243-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) ALKBH5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ALKBH5 Double Nickase (m) et le plasmide ALKBH5 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Alkbh5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) ALKBH5 | sc-435243-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) ALKBH5 | sc-435243-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Chez la souris, le gène **Alkbh5** code **ALKBH5**, une dioxygénase dépendante du Fe(II) et du 2‑oxoglutarate qui agit comme déméthylase de la **N6‑méthyladénosine (m6A)** de l’ARN, modulant l’épissage, l’export, la stabilité et la traduction des ARNm. En remodelant dynamiquement le paysage épitranscriptomique, ALKBH5 influence des programmes d’expression génique liés aux décisions de destin cellulaire, aux réponses au stress et aux processus de développement. L’activité d’ALKBH5 s’articule avec les voies des « writers » et des « readers » de la m6A afin de réguler des effets spécifiques à chaque transcrit et des réseaux de signalisation en aval. Une dérégulation de la méthylation de l’ARN médiée par ALKBH5 a été associée à des phénotypes altérés de prolifération et de différenciation dans des contextes cellulaires pertinents pour la maladie, ce qui en fait un nœud d’intérêt pour les études mécanistiques de la biologie des modifications de l’ARN.
ALKBH5 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Alkbh5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Alkbh5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Alkbh5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Alkbh5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.