ALG2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-410220

概要

ALG2は、α-1,3/1,6-マンノシルトランスフェラーゼ2をコードしており、小胞体におけるN結合型糖鎖付加経路で機能する重要な酵素である。これは糖鎖の初期組み立て段階において、脂質結合型オリゴ糖中間体を伸長させる。ALG2は、適切なタンパク質の折りたたみ、品質管理、ならびに分泌経路を介した輸送を支えることで、小胞体の恒常性やプロテオスタシスのネットワークに影響を与える。N-結合型糖鎖付加の各段階が障害されると、膜タンパク質や分泌タンパク質の成熟が乱れ、小胞体ストレスや細胞シグナル伝達の変化を引き起こし得る。ALG2機能に影響する変異は先天性糖鎖異常症（CDG）と関連づけられており、この酵素が発生や細胞生理に対してシステムレベルの影響を及ぼすことを示している。

ALG2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるALG2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ALG2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ALG2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ALG2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ALG2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ALG2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ALG2の機能に不可欠なALG2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ALG2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ALG2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびALG2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ALG2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ALG2 HDRプラスミド（h）および ALG2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはALG2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のALG2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。