ALDH1L2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406648

概要

ALDH1L2は、10-ホルミルテトラヒドロ葉酸デヒドロゲナーゼとして機能するミトコンドリア局在のアルデヒドデヒドロゲナーゼをコードしており、ミトコンドリア内の一炭素葉酸代謝およびレドックス恒常性を支えています。ホルミルTHFの回転（代謝回転）やNADP(H)連動反応を調節することで、ALDH1L2はヌクレオチド生合成能、ミトコンドリアの酸化バランス、ならびに代謝ストレスに対する細胞応答に影響を及ぼします。ミトコンドリアにおける一炭素フラックスの攪乱は、同化（アナボリック）需要や活性酸素種（ROS）の処理能を変化させ得ますが、これらの過程は増殖性の高い状態やストレス適応した細胞状態でしばしば変化しています。そのためALDH1L2は、代謝リプログラミング、ミトコンドリア機能、ならびに葉酸依存性経路における疾患関連の変化という文脈で研究されています。

ALDH1L2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるALDH1L2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ALDH1L2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ALDH1L2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ALDH1L2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ALDH1L2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ALDH1L2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ALDH1L2の機能に不可欠なALDH1L2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ALDH1L2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ALDH1L2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびALDH1L2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ALDH1L2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ALDH1L2 HDRプラスミド（h）および ALDH1L2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはALDH1L2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のALDH1L2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。