Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406326

概要

ヒトのALDH8A1は、アルデヒドデヒドロゲナーゼ8-A1をコードしており、反応性アルデヒドを対応する酸へと酸化するNAD(P)+依存性酵素である。これにより細胞内のアルデヒド解毒とレドックス恒常性の維持に寄与する。ALDH8A1の活性は、脂質過酸化に由来するアルデヒドを処理する代謝経路や、より広範なカルボニルストレス応答と交差し、アルデヒドによるタンパク質およびDNAへの付加体（アダクト）形成を抑えるのに役立つ。アルデヒドデヒドロゲナーゼ（ALDH）ファミリー酵素の機能異常は、酸化ストレス耐性の変化、代謝リプログラミング、ならびに電⼦求引性物質（エレクトロファイル）による損傷への脆弱性と関連し、さまざまな疾患の文脈で観察されている。生物医学研究では、内因性アルデヒド負荷が増大する条件下におけるミトコンドリアおよび細胞質の代謝、ストレスシグナル伝達、そして細胞の適応度に対する影響という観点からALDH8A1が研究されている。

Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるALDH8A1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ALDH8A1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ALDH8A1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ALDH8A1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1の機能に不可欠なALDH8A1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ALDH8A1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ALDH8A1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 HDRプラスミド（h）および Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはALDH8A1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のALDH8A1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。