Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406553

概要

ヒトのALDH6A1は、ミトコンドリア局在のメチルマロン酸セミアルデヒド脱水素酵素をコードしており、バリンおよびピリミジンの分解過程において、メチルマロン酸セミアルデヒドをプロピオニルCoAへと酸化するNAD(P)+依存性酵素である。ALDH6A1は、炭素をプロピオニルCoA代謝および下流のアナプレロティック（補充）経路へ供給することで、分岐鎖アミノ酸の代謝回転をミトコンドリアのエネルギー恒常性と酸化還元バランスに結び付けている。ALDH6A1活性の攪乱は、有機酸プロファイルやミトコンドリアのストレス応答を変化させ得るため、先天代謝異常の研究や、より広範なミトコンドリア機能障害の表現型に関する研究において重要である。また、アミノ酸分解が増殖状態やストレス適応状態を支えるような代謝リプログラミングの文脈でも、その発現と機能が注目されている。

Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるALDH6A1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ALDH6A1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ALDH6A1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ALDH6A1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1の機能に不可欠なALDH6A1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ALDH6A1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ALDH6A1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 HDRプラスミド（h）および Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはALDH6A1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のALDH6A1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。