ALAS-E CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403752

概要

ALAS2は赤血球系特異的な5-アミノレブリン酸合成酵素（ALAS-E）をコードしている。ALAS-Eはミトコンドリアに局在するピリドキサールリン酸依存性酵素で、グリシンとスクシニルCoAを縮合して5-アミノレブリン酸を生成することにより、ヘム生合成の最初の段階かつ律速段階を触媒する。その活性はミトコンドリア代謝と赤血球系の分化およびヘモグロビン化を統合し、発生過程の赤血球における鉄の利用とポルフィリン産生を支える。ALAS-Eは赤血球系の転写プログラムおよびヘム／鉄の利用可能性によって調節され、赤芽球におけるミトコンドリア機能や酸化ストレスを制御する経路と結び付いている。ALAS2の遺伝学的または機能的な攪乱は、ポルフィリン／ヘム合成の異常と関連しており、赤血球系成熟や赤血球病態生理のモデルで検討することができる。

ALAS-E CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるALAS2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ALAS2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ALAS2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ALAS-Eタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ALAS-Eシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ALAS2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ALAS-Eの機能に不可欠なALAS2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ALAS2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ALAS-E CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびALAS-E CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ALAS2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ALAS-E HDRプラスミド（h）および ALAS-E HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはALAS2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のALAS2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。