AKR7A2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403377-NIC

AKR7A2は、アルドケト還元酵素（aldo-keto reductase）ファミリー7のメンバーA2をコードしており、細胞質に局在するNADPH依存性の酸化還元酵素である。この酵素は、異物代謝や脂質過酸化の過程で生じる反応性アルデヒドおよびケトンの還元を触媒する。求電子性カルボニル種の解毒を通じて、AKR7A2は細胞のレドックス恒常性の維持や、酸化ストレス／カルボニルストレスからの防御に寄与し、アルデヒド代謝や、より広範な第I相／第II相代謝ネットワークとも交差する。反応性アルデヒドの処理異常は組織障害や炎症と関連づけられており、AKR7A2活性の変動は、代謝ストレスや発がん物質の処理が細胞の生存能およびゲノムの完全性に影響する状況で研究されている。これらの特性により、AKR7A2はヒト細胞モデルにおける解毒機構、ストレス適応シグナル、ならびに代謝関連疾患の表現型を検討するための有用な標的となる。

AKR7A2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AKR7A2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AKR7A2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AKR7A2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AKR7A2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。