Plasmide CRISPR d'Activation (h) AKR1B10: sc-403649-ACT

AKR1B10 code une aldo‑céto réductase humaine dépendante du NADPH, qui réduit des carbonyles réactifs ainsi que des aldéhydes issus de la peroxydation lipidique, contribuant au maintien de l’homéostasie rédox cellulaire et à la détoxification. En modulant le métabolisme des rétinoïdes et des lipides et en amortissant le stress oxydant, AKR1B10 influence les programmes de prolifération, de différenciation et de signalisation inflammatoire. Une expression dérégulée d’AKR1B10 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux ainsi que dans des états associés au stress métabolique et oxydant, où une prise en charge altérée des carbonyles peut remodeler la fitness cellulaire. Ainsi, AKR1B10 est fréquemment étudié comme un nœud reliant la réponse aux xénobiotiques, le remodelage lipidique et les voies d’adaptation au stress.

AKR1B10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AKR1B10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AKR1B10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AKR1B10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AKR1B10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AKR1B10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AKR1B10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AKR1B10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AKR1B10 dans les cellules tumorales présentant une expression de AKR1B10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.