Plasmide CRISPR d'Activation (h) AKR1A1: sc-416233-ACT

AKR1A1 (aldo-keto reductase family 1 member A1) code une oxydoréductase dépendante du NADPH qui catalyse la réduction d’aldéhydes réactifs et de substrats contenant des groupements carbonyle, contribuant ainsi à la détoxification cellulaire et à l’homéostasie redox. La protéine participe au métabolisme des aldéhydes et s’articule avec les systèmes de défense dépendants du glutathion en limitant l’accumulation de produits cytotoxiques issus de la peroxydation lipidique. En modulant le stress carbonyle et l’utilisation du NADPH, AKR1A1 influence les réponses au stress oxydant, la fonction mitochondriale et l’adaptation métabolique. Une activité d’AKR1A1 dérégulée a été associée à des altérations de la gestion des xénobiotiques et à des phénotypes de stress cellulaire pertinents pour les troubles métaboliques, l’inflammation et la biologie du cancer.

AKR1A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AKR1A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AKR1A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AKR1A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AKR1A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AKR1A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AKR1A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AKR1A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AKR1A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de AKR1A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.