AKAP 12 Plasmide Double Nickase (h): sc-406008-NIC

AKAP12 codifica la proteina di ancoraggio della A-chinasi 12 (AKAP12), una proteina scaffold che organizza spazialmente PKA, PKC e fosfatasi per coordinare una segnalazione compartimentalizzata a livello della membrana plasmatica e del citoscheletro. Integrando segnali provenienti da vie attivate da GPCR e da fattori di crescita, AKAP12 influenza la forma cellulare, la motilità, la dinamica dell’adesione e il rimodellamento del citoscheletro attraverso la regolazione di processi associati all’actina. Un’alterata espressione di AKAP12 o un diverso contesto di segnalazione sono stati collegati a programmi deregolati di migrazione e proliferazione rilevanti per la biologia del cancro e per risposte vascolari/infiammatorie. Queste proprietà rendono AKAP12 un bersaglio utile per studiare come la segnalazione delle chinasi ancorate governi la funzione di barriera, le risposte allo stress e fenotipi dipendenti dal microambiente.

AKAP 12 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AKAP12 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AKAP12. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AKAP12. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AKAP12 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.