Plasmide Double Nickase (h) AKAP 12: sc-406008-NIC

AKAP12 code la protéine d’ancrage de la protéine kinase A 12 (AKAP12), une protéine d’échafaudage qui organise spatialement la PKA, la PKC et des phosphatases afin de coordonner une signalisation compartimentée au niveau de la membrane plasmique et du cytosquelette. En intégrant des signaux issus des voies activées par les GPCR et les facteurs de croissance, AKAP12 influence la forme cellulaire, la motilité, la dynamique d’adhésion et le remodelage du cytosquelette via la régulation de processus associés à l’actine. Des altérations de l’expression d’AKAP12 ou du contexte de signalisation ont été associées à une dérégulation des programmes de migration et de prolifération, pertinente en biologie du cancer ainsi que dans les réponses vasculaires et inflammatoires. Ces propriétés font d’AKAP12 une cible utile pour étudier comment une signalisation des kinases ancrées gouverne la fonction de barrière, les réponses au stress et des phénotypes dépendants du microenvironnement.

AKAP 12 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AKAP12 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AKAP12. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AKAP12. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AKAP12.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.