Plasmide CRISPR d'Activation (h) AK2: sc-404166-ACT

AK2 humain (adénylate kinase 2) est une phosphotransférase de l’espace intermembranaire mitochondrial qui catalyse l’interconversion ATP/AMP afin de réguler l’homéostasie des nucléotides adényliques et l’équilibre énergétique cellulaire. En modulant les rapports locaux ATP/ADP/AMP, AK2 soutient la phosphorylation oxydative mitochondriale et influence les réponses au stress métabolique liées à la signalisation AMPK ainsi que la susceptibilité à l’apoptose. L’activité d’AK2 est également associée à la biologie des cellules hématopoïétiques et immunitaires, où le métabolisme mitochondrial des nucléotides contribue aux programmes de prolifération et de différenciation. Une dérégulation ou des altérations génétiques d’AK2 ont été liées à des phénotypes d’immunodéficience et hématologiques, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le dialogue entre métabolisme mitochondrial et système immunitaire.

AK2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AK2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AK2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AK2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AK2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AK2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AK2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AK2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AK2 dans les cellules tumorales présentant une expression de AK2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.