AIRE-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401225

概要

自己免疫調節因子（AIRE；AIRE-1）は核内転写調節因子であり、胸腺髄質上皮細胞における組織特異的抗原の異所性発現を促進することで中枢性免疫寛容を確立し、負の選択を可能にしてT細胞レパートリーを形成します。AIREは、ヒストン修飾や転写機構との相互作用を介してクロマチンおよび転写関連プロセスを協調的に制御し、胸腺での選択や免疫恒常性に関わる遺伝子発現プログラムを支えます。AIRE機能の破綻は寛容の崩壊と自己免疫に関連し、AIRE依存的な転写プログラムの変化は炎症性表現型や免疫調節異常の文脈で研究されています。その結果、AIREは転写制御、抗原提示の生物学、ならびに自己寛容を司る機構を検討するためのモデル座位として広く用いられています。

AIRE-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAIRE遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AIRE内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AIREのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AIRE-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AIRE-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AIRE欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AIRE-1の機能に不可欠なAIREエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AIREゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AIRE-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAIRE-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AIRE遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AIRE-1 HDRプラスミド（h）および AIRE-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAIREホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAIRE標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。