Plasmide CRISPR d'Activation (h) AIM1: sc-410680-ACT

Absent in melanoma 1 (AIM1) code une protéine associée au cytosquelette, impliquée dans le maintien de l’architecture cellulaire et la régulation de processus liés à l’actine qui influencent l’adhésion, la migration et l’organisation tissulaire. Les profils d’expression d’AIM1 ont été associés à des états de différenciation cellulaire et à des modifications du comportement invasif, en accord avec des rôles dans le remodelage du cytosquelette et la signalisation sensible au stress. Une dérégulation d’AIM1 a été rapportée dans de multiples contextes cancéreux, où une expression altérée peut être corrélée à la progression tumorale et au potentiel métastatique. Ces caractéristiques font d’AIM1 une cible utile pour étudier comment l’intégrité du cytosquelette et les programmes transcriptionnels s’articulent pour façonner le phénotype cellulaire.

AIM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AIM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AIM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AIM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AIM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AIM1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AIM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AIM1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AIM1 dans les cellules tumorales présentant une expression de AIM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.