Partículas Lentivirales de Activación (h) AHCYL1: sc-417109-LAC

AHCYL1 (adenosilhomocisteína hidrolasa‑like 1) codifica una proteína citosólica implicada en la señalización dependiente de calcio y en las respuestas al estrés celular, con funciones descritas en la modulación de la dinámica de Ca²⁺ vinculada al receptor de inositol 1,4,5‑trifosfato (IP3R) y de los programas transcripcionales posteriores. A través de sus efectos sobre la movilización de Ca²⁺, AHCYL1 puede influir en vías que controlan la apoptosis, la proliferación y la diferenciación, incluidas MAPK/ERK y otros nodos de señalización sensibles a los cambios del calcio intracelular. La desregulación de la expresión de AHCYL1 o del contexto de su señalización se ha asociado con alteraciones en la supervivencia celular y fenotipos inflamatorios en modelos relevantes para enfermedades, lo que respalda su estudio en oncología, neurobiología y señalización inmunitaria. Como gen humano, AHCYL1 se evalúa con frecuencia por sus contribuciones a la transcripción dependiente de estímulos, la integración del estrés mitocondrial y el entrecruzamiento de vías impulsado por la señalización de segundos mensajeros.

Las partículas de activación lentiviral AHCYL1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de AHCYL1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral AHCYL1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción AHCYL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de AHCYL1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo AHCYL1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.