Plasmide CRISPR d'Activation (h) AGR3: sc-406892-ACT

La protéine antérograde 3 (AGR3) est un membre humain de la famille des isomérases de disulfure, localisé dans la voie sécrétoire, où elle favorise le repliement oxydatif des protéines et la maturation de certaines protéines clientes. AGR3 contribue à la protéostasie du réticulum endoplasmique et aux programmes de différenciation épithéliale, et son expression est souvent enrichie dans les épithéliums sécrétoires et producteurs de mucus. Une expression dérégulée d’AGR3 a été rapportée dans plusieurs cancers d’origine épithéliale et est étudiée dans le contexte du phénotype des cellules tumorales, de l’adaptation au stress et du remodelage de la voie sécrétoire. Ces caractéristiques font d’AGR3 un point d’entrée utile pour étudier le contrôle qualité du RE, la signalisation liée à la sécrétion et les états transcriptionnels associés à la biologie épithéliale.

AGR3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AGR3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AGR3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AGR3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AGR3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AGR3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AGR3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AGR3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AGR3 dans les cellules tumorales présentant une expression de AGR3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.