AGPS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432759

概要

Agpsはアルキルグリセロンリン酸シンターゼ（AGPS）をコードしており、AGPSはプラズマローゲン生合成におけるエーテル結合形成の主要段階を触媒するペルオキシソーム酵素である。AGPSはエーテル型リン脂質の細胞内プールを制御することで、膜構造、脂質ラフトの組成、ならびにプラズマローゲンに関連する抗酸化能を介したレドックス緩衝に寄与する。AGPS依存的な脂質リモデリングは、ペルオキシソームと小胞体の代謝的カップリングおよび、より広範なグリセロリン脂質恒常性にも影響を与える。エーテル脂質代謝の破綻は、ペルオキシソーム関連の代謝表現型や神経発達機能障害に関与することが示唆されており、マウス系においてAgpsの改変を用いることは、経路レベルの脂質異常をモデル化するうえで有用であることを支持する。

AGPS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAgps遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Agps内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Agpsのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AGPSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AGPSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Agps欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AGPSの機能に不可欠なAgpsエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Agpsゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AGPS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAGPS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Agps遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AGPS HDRプラスミド（m）および AGPS HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAgpsホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAgps標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。