AFP/Alpha fetoprotein CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400355

概要

AFP（αフェトプロテイン）は分泌型の腫瘍胎児性糖タンパク質をコードしており、胎生期の発生過程で高発現し、出生後は主にサイレンシングされます。胎生期には成長および分化プログラムの制御に寄与します。成人組織では、AFPの再発現はしばしば肝系譜状態の変化や、腫瘍微小環境における細胞外シグナルおよび免疫シグナルのリモデリングと関連しています。AFP発現は肝細胞癌および胚細胞腫瘍の生物学に関する研究で分子学的特徴として用いられ、肝細胞分化、増殖、ストレス応答に関連する経路と併せて評価されることが一般的です。また、循環タンパク質としてのAFPは、ヒト細胞モデルにおける転写制御や分泌経路ダイナミクスを評価するための扱いやすい指標にもなります。

AFP/Alpha fetoprotein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAFP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AFP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AFPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AFP/Alpha fetoproteinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AFP/Alpha fetoproteinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AFP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AFP/Alpha fetoproteinの機能に不可欠なAFPエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AFPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AFP/Alpha fetoprotein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAFP/Alpha fetoprotein CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AFP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AFP/Alpha fetoprotein HDRプラスミド（h）および AFP/Alpha fetoprotein HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAFPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAFP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。