Plasmide Double Nickase (h) AFG3L2: sc-404565-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AFG3L2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AFG3L2 Double Nickase (h) et le plasmide AFG3L2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AFG3L2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) AFG3L2 | sc-404565-NIC | 20 µg | $410.00 |
AFG3L2 code une métalloprotéase AAA+ de la membrane interne mitochondriale qui forme le complexe protéase m‑AAA, assurant un contrôle qualité des protéines dépendant de l’ATP du côté de la membrane interne faisant face à l’espace intermembranaire. En régulant le renouvellement et la maturation de composants de la chaîne respiratoire ainsi que de substrats liés au ribosome mitochondrial, AFG3L2 contribue à l’efficacité de la phosphorylation oxydative, à la protéostasie mitochondriale et à la signalisation d’adaptation au stress. La perte ou le dysfonctionnement d’AFG3L2 perturbe la dynamique mitochondriale et la bioénergétique, favorisant l’accumulation de protéines mal repliées et une homéostasie organellaire altérée. Des variants d’AFG3L2 sont associés à des phénotypes neurodégénératifs, reliant l’activité des protéases mitochondriales à la vulnérabilité neuronale et au maintien des axones.
AFG3L2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AFG3L2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AFG3L2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AFG3L2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AFG3L2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.