AdSS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419031

概要

Adss はアデニロコハク酸合成酵素2（AdSS2）をコードしており、de novo プリン生合成における重要酵素として、IMP をアデニロコハク酸へ変換する反応を触媒し、AMP 産生と細胞内ヌクレオチドバランスの維持に寄与します。AdSS2 はアデニンヌクレオチドの利用可能性を制御することで、DNA/RNA 合成、エネルギー代謝、増殖能に影響し、プリン代謝フラックスを細胞周期進行と結び付ける代謝プログラムとも交差します。プリン生合成酵素の撹乱は、増殖表現型やストレス応答の変化と関連することから、AdSS2 は、がん生物学などヌクレオチド需要が高まる状況における代謝リプログラミング研究において重要な対象となります。マウスモデルでは、Adss はプリン供給が生合成やアデニンヌクレオチド依存性のシグナル伝達経路をどのように制約するかを解析するための扱いやすい結節点（ノード）となります。

AdSS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAdss遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Adss内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Adssのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AdSS2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AdSS2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Adss欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AdSS2の機能に不可欠なAdssエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Adssゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AdSS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAdSS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Adss遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AdSS2 HDRプラスミド（m）および AdSS2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAdssホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAdss標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。