ADO Double Nickase Plasmid (h): sc-408985-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ADO Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ADO Double-Nickase-Plasmid (h) und ADO Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ADO abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ADO: sc-515318
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ADO Double Nickase Plasmid (h) | sc-408985-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADO Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408985-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes ADO (2‑Aminoethanthiol-Dioxygenase) ist ein nicht‑Häm-Eisenenzym, das die Oxygenierung von Cysteamin zu Hypotaurin katalysiert und damit den Umsatz von Coenzym A mit der Taurinbiosynthese und dem zellulären Redoxgleichgewicht verknüpft. Durch die Steuerung des Flusses reaktiver Aminothiole beeinflusst ADO die Thiol-Homöostase, die antioxidative Kapazität und die metabolische Anpassung an oxidativen Stress und Nährstoffmangel. Die ADO‑abhängige Cysteamin‑Hypotaurin‑Achse überschneidet sich mit dem Stoffwechsel schwefelhaltiger Aminosäuren und kann nachgelagerte Prozesse wie die mitochondriale Funktion und inflammatorische Signalwege modulieren. Veränderte Aminothiol‑Metabolismen und eine veränderte Taurinverfügbarkeit wurden mit kardiometabolischen und neurobiologischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was ADO zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien des stressresponsiven Stoffwechsels macht.
ADO Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ADO-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ADO abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ADO-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ADO-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.