Plásmido Doble Nickase (m) ADH5: sc-419007-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)ADH5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ADH5 (m) y el plásmido de doble nickasa ADH5 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Adh5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) ADH5 | sc-419007-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) ADH5 | sc-419007-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Adh5 del ratón codifica la alcohol deshidrogenasa 5 (ADH5), una deshidrogenasa citosólica de amplia expresión que actúa como reductasa de S-nitrosoglutatión para regular la bioactividad del óxido nítrico al metabolizar el S-nitrosoglutatión y aductos relacionados derivados del formaldehído. Mediante el control de la S-nitrosilación de proteínas y del equilibrio redox, ADH5 influye en las respuestas al estrés oxidativo y nitrosativo, el metabolismo dependiente de glutatión y las vías de señalización posteriores que afectan la función mitocondrial y los programas inflamatorios. La alteración de la actividad de ADH5 se ha relacionado con una capacidad de detoxificación modificada y una señalización del NO desregulada, con implicaciones en modelos de lesión hepática, disfunción inmunitaria y procesos neurodegenerativos en los que se acumulan especies reactivas de carbonilo y nitrógeno. Por ello, Adh5 constituye una diana manejable para estudiar redes de adaptación al estrés y la regulación sensible al estado redox de la homeostasis celular en sistemas murinos.
ADH5 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Adh5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Adh5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Adh5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Adh5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.