ADH5 Double Nickaseプラスミド (m): sc-419007-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ADH5 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ADH5ダブルニカースプラスミド（m）およびADH5ダブルニカースプラスミド（m2）は、Adh5を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ADH5 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-419007-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADH5 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-419007-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスの Adh5 は、アルコール脱水素酵素5（ADH5）をコードしており、広く発現する細胞質デヒドロゲナーゼである。ADH5 は S-ニトロソグルタチオン還元酵素として機能し、S-ニトロソグルタチオンおよびそれに関連するホルムアルデヒド由来付加体を代謝することで、一酸化窒素（NO）の生物活性を調節する。タンパク質の S-ニトロシル化とレドックスバランスの制御を介して、ADH5 は酸化・ニトロソ化ストレス応答、グルタチオン依存性代謝、ならびにミトコンドリア機能や炎症プログラムに影響する下流シグナル伝達経路に作用する。ADH5 活性の攪乱は解毒能の変化や NO シグナル伝達の破綻と関連づけられており、反応性カルボニル種および窒素種が蓄積する肝障害、免疫機能不全、神経変性過程のモデルにおいて示唆的である。したがって Adh5 は、マウス系におけるストレス適応ネットワークや、レドックス感受性による細胞恒常性制御を研究するための扱いやすい標的となる。
ADH5 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Adh5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Adh5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Adh5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Adh5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。