Plásmido Doble Nickase (h) ADH1: sc-402260-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ADH1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ADH1 (h) y el plásmido de doble nickasa ADH1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ADH1A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ADH1 | sc-402260-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ADH1 | sc-402260-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano ADH1A codifica la alcohol deshidrogenasa 1A (ADH1), una oxidorreductasa citosólica dependiente de zinc que cataliza la oxidación del etanol y de otros alcoholes alifáticos y aromáticos de cadena corta a sus aldehídos correspondientes, en una reacción dependiente de NAD⁺. Esta actividad contribuye al metabolismo hepático del alcohol y de los retinoides, e influye en el equilibrio redox y en el flujo de metabolitos, lo que puede afectar las respuestas al estrés oxidativo y las vías de manejo de lípidos. La variación o desregulación de la actividad de las alcohol deshidrogenasas se estudia en el contexto del daño tisular relacionado con el etanol y de fenotipos metabólicos, y la expresión de ADH1A se utiliza con frecuencia como marcador del estado de diferenciación de los hepatocitos en sistemas experimentales. ADH1A/ADH1 también ofrece un punto de entrada manejable para analizar el procesamiento de aldehídos y la señalización posterior vinculada a programas de estrés celular e inflamación.
ADH1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ADH1A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ADH1A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ADH1A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ADH1A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.