Adh1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419005

概要

Adh1 はアルコール脱水素酵素1をコードしており、細胞質に局在する酸化還元酵素として、NAD+/NADH 依存的に短鎖アルコールとアルデヒドの相互変換を触媒し、細胞内のレドックスバランスおよび中間代謝に寄与します。マウス組織では、ADH1 活性はアルコールや異物（ゼノバイオティクス）の代謝を支えるとともに、アルデヒド解毒、酸化ストレス応答、脂質／カルボニル恒常性を制御する経路と連携します。アルコール／アルデヒドの処理能の変化は、肝障害、炎症、代謝機能障害のモデルにおいて重要であり、NADH/NAD+ 比の変動や反応性アルデヒドの蓄積がミトコンドリア機能やシグナル伝達に影響し得ます。基質特異性が広い代謝酵素として、Adh1 は解毒能や組織特異的な代謝適応を検討する研究でしばしば解析対象となります。

Adh1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAdh1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Adh1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Adh1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Adh1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Adh1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Adh1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Adh1の機能に不可欠なAdh1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Adh1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Adh1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAdh1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Adh1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Adh1 HDRプラスミド（m）および Adh1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAdh1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAdh1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。