ADF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417540

Visão geral

O DSTN humano codifica o fator despolimerizador de actina (ADF), uma proteína central de ligação à actina que secciona e despolimeriza a F-actina para sustentar a renovação dos filamentos e manter a homeostase do citoesqueleto. Ao regular a dinâmica da actina, o ADF apoia processos como a remodelação de lamelipódios, endocitose, citocinese e migração celular, e interage funcionalmente com a sinalização de GTPases da família Rho e com as redes regulatórias de fosforilação de cofilina/ADF. A remodelação alterada da actina está associada a defeitos na integridade da barreira epitelial, na morfogénese neuronal e no comportamento celular invasivo, tornando o DSTN um nó relevante para o estudo de fenótipos de doença impulsionados pelo citoesqueleto. Assim, a perturbação de DSTN é útil para dissecar como o fluxo de actina influencia a mecanotransdução, a sinalização de adesão e as respostas ao stress em células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ADF (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DSTN em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DSTN, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DSTN na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ADF.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DSTN para a investigação da sinalização de ADF, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DSTN críticos para a função ADF
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DSTN para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ADF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ADF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DSTN. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ADF Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ADF (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DSTN para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DSTN definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.