Plásmido CRISPR de Activación (m) Adenylate cyclase 10/ADCY10: sc-435448-ACT

Adcy10 codifica la adenilato ciclasa 10 (ADCY10), una adenilil ciclasa “soluble” atípica, regulada por bicarbonato y Ca2+, que genera AMPc de manera independiente de la señalización de receptores acoplados a proteína G. Al controlar la producción local de AMPc, ADCY10 modula la señalización dependiente de PKA y EPAC, influyendo en redes de fosforilación, el transporte iónico y programas de transcripción como la regulación génica mediada por el elemento de respuesta al AMPc (CRE). En sistemas murinos, la actividad de Adcy10 se estudia con frecuencia en el contexto del sensado intracelular de pH/CO2, los microdominios metabólicos y mitocondriales de AMPc, y la comunicación cruzada de la señalización con la dinámica del calcio. La desregulación de la señalización por AMPc se ha implicado ampliamente en defectos de la homeostasis celular y en fenotipos dependientes de la señalización, lo que respalda el uso de Adcy10 como un nodo mecanístico en modelos de enfermedad centrados en vías, sin implicar resultados clínicos.

Adenylate cyclase 10/ADCY10 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Adcy10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Adenylate cyclase 10/ADCY10 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Adcy10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Adcy10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Adenylate cyclase 10/ADCY10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Adcy10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Adenylate cyclase 10/ADCY10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Adenylate cyclase 10/ADCY10 en células tumorales con expresión de Adcy10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.