Adenosine A2B-R Double Nickase Plasmid (m): sc-419015-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Adenosine A2B-R Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Adenosine A2B-R Double-Nickase-Plasmid (m) und Adenosine A2B-R Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Adora2b abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Adenosine A2B-R Double Nickase Plasmid (m) | sc-419015-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Adenosine A2B-R Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419015-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Adora2b kodiert den murinen Adenosin-A2B-Rezeptor (Adenosin A2B-R), einen G-Protein-gekoppelten Rezeptor, der extrazelluläres Adenosin wahrnimmt, das bei metabolischem Stress und Entzündungen entsteht. A2B-R koppelt vor allem an Gs- und Gq-Signalwege und reguliert dadurch cAMP/PKA- sowie PLC–Ca²⁺-Signalwege. So beeinflusst er nachgeschaltete Kinasekaskaden und Transkriptionsprogramme, die Barrierefunktion, Zytokinproduktion und Gefäßtonus mitbestimmen. In Immun- und Stromakompartimenten moduliert die A2B-R-Signalübertragung die Leukozytenrekrutierung, die Aktivierung myeloider Zellen und Fibroblastenreaktionen und verknüpft purinerge Signale mit hypoxie- und entzündungsassoziierten Netzwerken. Eine fehlregulierte ADORA2B-Aktivität wird mit entzündlichen und fibrotischen Prozessen, ischämieassoziiertem Gewebeumbau sowie Signalgebung im Tumormikromilieu in Verbindung gebracht und ist daher für mechanistische Studien der purinergen Regulation in Krankheitsmodellen relevant.
Adenosine A2B-R Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Adora2b-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Adora2b abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Adora2b-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Adora2b-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.