Adducin α CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401693-ACT

ヒトADD1は、膜骨格タンパク質であるアデュシンαをコードしており、アクチンフィラメントのキャップ形成と束化を行うとともに、形質膜におけるスペクトリン–アクチンネットワークの組み立てを促進します。細胞骨格リモデリング、細胞間接着の安定性、膜構造の制御を介して、ADD1は赤血球の完全性に寄与し、さらに細胞形態や細胞運動性の広範な制御にも関与します。PKCやRho関連シグナルなどのキナーゼによるアデュシンのリン酸化は、アクチンおよびスペクトリンに対する親和性を調節し、皮質（コルチカル）アーキテクチャの動的制御と結び付けられています。ADD1の遺伝学的・機能的な攪乱は、膜の安定性やシグナル伝達の表現型の変化と関連づけられており、血管生物学、高血圧リスク座位、ならびに複合疾患における細胞骨格関連機構の研究において重要です。

Adducin α CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ADD1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Adducin α CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ADD1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はADD1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Adducin αの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のADD1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAdducin α依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびADD1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAdducin α経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。