ADAMTS-9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402605-ACT

ADAMTS9 kodiert ADAMTS-9, eine sekretierte, zinkabhängige Metalloproteinase, die an der Umgestaltung der extrazellulären Matrix durch proteolytische Verarbeitung von Proteoglykanen wie Aggrecan und Versican beteiligt ist. Durch die Regulation der Matrixzusammensetzung, perizellulärer Proteolyse und der Gewebemorphogenese beeinflusst ADAMTS-9 Zelladhäsion, Migration und die Signalweg-Crosstalk mit entwicklungs- und entzündungsassoziierten Signalwegen. Eine veränderte ADAMTS9-Expression oder -Aktivität wurde mit der Biologie von Bindegewebe und Knorpel in Verbindung gebracht und in Kontexten des Umbaus des Tumormikromilieus sowie vaskulärer oder metabolischer Phänotypen untersucht. Diese Eigenschaften machen ADAMTS-9 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien zur ECM-Dynamik, zu Zell–Matrix-Interaktionen und zu proteasenregulierter Signalübertragung.

ADAMTS-9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADAMTS9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ADAMTS-9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADAMTS9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADAMTS9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ADAMTS-9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADAMTS9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ADAMTS-9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ADAMTS-9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADAMTS9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.