ADAMTS-12 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403884-ACT

ADAMTS12 kodiert ADAMTS-12, eine sezernierte Metalloproteinase aus der ADAMTS-Familie, die die extrazelluläre Matrix durch die Prozessierung von Proteoglykanen und verwandten Matrixkomponenten umgestaltet. Durch die Regulation des Matrixumsatzes, der Zell–Matrix-Adhäsion und der Dynamik des Gewebemikromilieus beeinflusst ADAMTS-12 Signalwege, die mit Entwicklung, Entzündung und stromalem Remodeling verknüpft sind. Eine veränderte ADAMTS12-Expression wurde mit Änderungen der Homöostase von Knorpel- und Bindegewebe sowie mit Tumor–Stroma-Interaktionen bei mehreren Krebsarten in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen ADAMTS-12 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung extrazellulärer Proteolyse, matrixabhängiger Signalübertragung und mikromilieugetriebener Phänotypen.

ADAMTS-12 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADAMTS12-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ADAMTS-12 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADAMTS12-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADAMTS12-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ADAMTS-12-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADAMTS12-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ADAMTS-12-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ADAMTS-12-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADAMTS12-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.