Plasmide CRISPR d'Activation (h) ADAMDEC1: sc-405515-ACT

ADAMDEC1 code une métalloprotéase sécrétée de la famille ADAM (a disintegrin and metalloprotease) qui contribue au remodelage de la matrice extracellulaire et à la régulation de la protéolyse péricellulaire. Elle est principalement associée aux compartiments immunitaires myéloïdes et muqueux, où elle a été liée à la signalisation inflammatoire, à la différenciation des leucocytes et aux processus de surveillance tissulaire. En modulant le milieu extracellulaire, ADAMDEC1 peut influencer la migration cellulaire, la dynamique d’adhésion et des voies sensibles aux cytokines qui façonnent les réponses immunitaires locales. Des altérations de l’expression d’ADAMDEC1 ont été rapportées dans des études portant sur l’inflammation gastro-intestinale, la biologie du microenvironnement tumoral et l’infiltration immunitaire, ce qui soutient son intérêt en tant que marqueur moléculaire en immunologie et en recherche sur le cancer.

ADAMDEC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADAMDEC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ADAMDEC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADAMDEC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADAMDEC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ADAMDEC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADAMDEC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ADAMDEC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ADAMDEC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ADAMDEC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.