ADAM8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418993

概要

Adam8 は、膜貫通型のメタロプロテアーゼ／ディスインテグリン（ADAM8）をコードしており、エクトドメイン・シェディングおよび細胞―細胞／細胞―細胞外マトリックス相互作用を仲介し、タンパク質分解と接着シグナル伝達を統合します。マウスの免疫系および間質系コンパートメントにおいて、ADAM8 は細胞表面受容体の制御やサイトカイン／ケモカインの利用可能性の調節を通じて、炎症性シグナル、白血球の動員、組織リモデリングに寄与します。その活性は、受容体活性化や細胞外微小環境からの刺激を調整することで、MAPK や NF-κB のシグナル出力に関連する経路とも交差します。Adam8 発現の破綻は、慢性炎症や線維化、さらに浸潤や転移ニッチのリモデリングといった腫瘍関連プロセスと関連づけられており、疾患モデルにおける機序解明研究で重要な標的となります。

ADAM8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAdam8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Adam8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Adam8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ADAM8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ADAM8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Adam8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ADAM8の機能に不可欠なAdam8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Adam8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ADAM8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびADAM8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Adam8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ADAM8 HDRプラスミド（m）および ADAM8 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAdam8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAdam8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。