Plasmide CRISPR d'Activation (h) ADAM8: sc-407606-ACT

ADAM8 code une métalloprotéase–désintégrine ancrée à la membrane, qui médie le clivage de l’ectodomaine (« shedding ») ainsi que des interactions cellule–cellule ou cellule–matrice, reliant la protéolyse à une signalisation dépendante de l’adhésion. En maturant certains récepteurs de surface, cytokines et composants de la matrice extracellulaire, ADAM8 peut influencer le trafic des leucocytes, la signalisation inflammatoire et des programmes de remodelage qui façonnent les microenvironnements tissulaires. Son activité recoupe des voies impliquées dans la migration et l’invasion, notamment la signalisation liée aux intégrines et des réseaux de protéases qui régulent le renouvellement de la matrice extracellulaire. Une expression dérégulée d’ADAM8 a été associée à des affections inflammatoires et à plusieurs contextes cancéreux, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la communication, pilotée par les protéases, entre compartiments immunitaires et stromaux.

ADAM8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADAM8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ADAM8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADAM8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADAM8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ADAM8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADAM8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ADAM8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ADAM8 dans les cellules tumorales présentant une expression de ADAM8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.