ACTR-IIB Double Nickase Plasmid (m): sc-418977-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ACTR-IIB Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ACTR-IIB Double-Nickase-Plasmid (m) und ACTR-IIB Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Acvr2b abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ACTR-IIB: sc-376593
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACTR-IIB Double Nickase Plasmid (m) | sc-418977-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACTR-IIB Double Nickase Plasmid (m2) | sc-418977-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Acvr2b kodiert den Activin-Rezeptor Typ IIB (ACTR-IIB), eine transmembranäre Serin/Threonin-Kinase, die Liganden der TGF-β-Superfamilie wie Myostatin (GDF8), Activine und verwandte Wachstumsfaktoren bindet. Nach Ligandenbindung bildet ACTR-IIB Signalkomplexe mit Typ-I-Rezeptoren, um SMAD2/3-abhängige Transkriptionsprogramme zu aktivieren, die Skelettmuskelmasse, Fettgewebsbiologie, Fibrose und zelluläre Differenzierung regulieren. In Mausmodellen wird die Acvr2b-Signalübertragung häufig genutzt, um die Kontrolle von Gewebewachstum und -remodellierung in Muskel- und Stoffwechselwegen sowie kontextabhängige Entzündungs- und Extrazellulärmatrix-Antworten zu untersuchen. Eine fehlregulierte Aktivität des ACTR-IIB-Signalwegs wurde mit Muskelabbau-Phänotypen und einer veränderten Energiehomöostase in Verbindung gebracht und macht ihn zu einem relevanten Ansatzpunkt für mechanistische Studien in neuromuskulären und metabolischen Krankheitsmodellen.
ACTR-IIB Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Acvr2b-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Acvr2b abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Acvr2b-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Acvr2b-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.