ACTL7B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418970

概要

Actl7bは、精巣で高発現するアクチン様タンパク質ACTL7Bをコードしており、精子細胞（spermatid）の分化および精子形態形成の過程における細胞骨格リモデリングに関与すると考えられています。アクチンファミリーの一員として、ACTL7Bは先体—核複合体の形成をはじめ、運動性や受精能に必要な、マイクロフィラメント依存的構造の組織化を支えるプロセスと関連しています。生殖細胞におけるアクチン動態の破綻は、精子頭部形成異常、精子機能低下、雄の受胎能低下といった表現型と関連づけられています。したがってActl7bは、マウスモデルにおける細胞骨格制御、精子形成（spermiogenesis）、ならびに生殖適応度を規定する遺伝子ネットワークの研究を進めるうえで有用な足掛かりとなります。

ACTL7B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるActl7b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Actl7b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Actl7bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ACTL7Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ACTL7Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Actl7b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ACTL7Bの機能に不可欠なActl7bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Actl7bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ACTL7B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびACTL7B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Actl7b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ACTL7B HDRプラスミド（m）および ACTL7B HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはActl7bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のActl7b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。