ACTL7B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418970

Panoramica

Actl7b codifica ACTL7B, una proteina actino-simile arricchita nel testicolo, implicata nel rimodellamento del citoscheletro durante la differenziazione degli spermatidi e la morfogenesi degli spermatozoi. In quanto membro della famiglia dell’actina, ACTL7B è associata a processi che modellano il complesso acrosoma–nucleo e supportano l’organizzazione di strutture dipendenti dai microfilamenti necessarie per la motilità e la competenza alla fecondazione. Alterazioni della dinamica dell’actina nelle cellule germinali sono associate a un’anomala formazione della testa dello spermatozoo, a una ridotta funzionalità spermatica e a fenotipi di subfertilità maschile. Actl7b rappresenta quindi un utile punto di partenza per studiare, in modelli murini, la regolazione del citoscheletro, la spermiogenesi e le reti geniche che governano l’efficienza riproduttiva.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTL7B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Actl7b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Actl7b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Actl7b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACTL7B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Actl7b per lo studio della segnalazione di ACTL7B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Actl7b critici per la funzione di ACTL7B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Actl7b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACTL7B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ACTL7B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Actl7b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACTL7B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ACTL7B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Actl7b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Actl7b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.