ACTC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418966

概要

Actc1は、横紋筋における主要なサルコメア薄フィラメント構成要素であるα心筋アクチン（ACTC1）をコードしており、F-アクチンへと重合して力発生を支えます。ACTC1はミオシン、トロポミオシン、トロポニン複合体と協調してCa2+依存的収縮を制御し、筋原線維の組み立て、サルコメア構造の形成、ならびに細胞骨格のメカノトランスダクションに寄与します。マウスにおいてActc1は心筋および骨格筋の発生・リモデリングに深く関与しており、アクチンフィラメント動態を、収縮性、細胞構造、ストレス応答を制御する経路と結び付けています。ACTC1の遺伝学的・機能的な撹乱は、心筋症関連の表現型や異常な筋機能と関連しており、サルコメアの完全性や心筋生理における疾患関連変化を研究するうえで有用な標的となります。

ACTC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるActc1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Actc1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Actc1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ACTC1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ACTC1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Actc1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ACTC1の機能に不可欠なActc1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Actc1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ACTC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびACTC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Actc1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ACTC1 HDRプラスミド（m）および ACTC1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはActc1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のActc1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。