Plasmide CRISPR d'Activation (h) ACSVL1: sc-405122-ACT

SLC27A2 code l’acyl‑CoA synthétase 1 des acides gras à très longue chaîne (ACSVL1), une enzyme de transport et d’activation des acides gras qui convertit les acides gras à longue chaîne et à très longue chaîne en thioesters acyl‑CoA. Cette réaction soutient l’utilisation des lipides par les mitochondries et les peroxysomes, en couplant l’entrée des acides gras à la β‑oxydation, au remodelage lipidique et à l’homéostasie énergétique. L’activité d’ACSVL1 s’articule avec des voies qui régulent la dynamique des gouttelettes lipidiques, la fonction peroxysomale et les réponses au stress métabolique. La dérégulation de l’activation des acides gras et de la gestion des lipides à très longue chaîne est pertinente pour l’étude des mécanismes des maladies métaboliques, de la signalisation inflammatoire liée à la lipotoxicité et du métabolisme lipidique spécifique des tissus dans des modèles de foie et de muscle.

ACSVL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC27A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACSVL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC27A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC27A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACSVL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC27A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACSVL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACSVL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC27A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.