Plasmide CRISPR d'Activation (h) Acrp30: sc-401327-ACT

ADIPOQ code l’adipokine Acrp30 (adiponectine), une protéine sécrétée principalement produite par les adipocytes, qui circule sous forme de complexes multimériques et régule l’homéostasie énergétique systémique. Acrp30 se lie à des récepteurs tels qu’ADIPOR1/ADIPOR2 pour moduler les voies de signalisation AMPK et PPARα, favorisant l’oxydation des acides gras, l’utilisation du glucose et des programmes anti-inflammatoires dans les tissus métaboliques. Des altérations de l’expression d’ADIPOQ et de la signalisation de l’adiponectine sont associées à la résistance à l’insuline, aux dysfonctions métaboliques liées à l’obésité, à la stéatose hépatique non alcoolique et à des phénotypes de risque cardiovasculaire. Dans des modèles cellulaires, ADIPOQ est utilisé pour étudier la différenciation des adipocytes, la sécrétion d’adipokines et le dialogue entre le tissu adipeux et les voies hépatiques, musculaires et immunitaires.

Acrp30 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADIPOQ sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Acrp30 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADIPOQ dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADIPOQ, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Acrp30. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADIPOQ natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Acrp30 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Acrp30 dans les cellules tumorales présentant une expression de ADIPOQ silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.