Acrosin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418952

概要

マウスのAcrは、トリプシン様のセリンプロテアーゼであるアクロシンをコードしている。アクロシンは、ザイモゲンであるプロアクロシンとして精子先体内に蓄えられ、先体反応の過程で活性化される。アクロシンは精子頭部におけるタンパク質分解を伴うリモデリングに寄与し、透明帯の貫通を支えるとともに、精子の受精能獲得、先体放出、配偶子膜相互作用を制御する諸過程と統合的に機能する。アクロシン活性の撹乱は受精能の異常と関連しており、雄性生殖生物学を研究するうえでの機序解明の手がかりとして用いられている。より広いセリンプロテアーゼネットワークの一部として、アクロシンは、調節されたザイモゲン活性化および細胞外マトリックス関連のタンパク質分解を理解するためのモデルにもなる。

Acrosin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAcr遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Acr内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Acrのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Acrosinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Acrosinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Acr欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Acrosinの機能に不可欠なAcrエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Acrゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Acrosin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAcrosin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Acr遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Acrosin HDRプラスミド（m）および Acrosin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAcrホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAcr標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。