ACADS Double Nickase Plasmid (h): sc-405458-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ACADS Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ACADS Double-Nickase-Plasmid (h) und ACADS Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACADS abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ACADS: sc-365953
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACADS Double Nickase Plasmid (h) | sc-405458-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACADS Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405458-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACADS kodiert die kurzkettige Acyl‑CoA‑Dehydrogenase, ein mitochondriales Flavoprotein, das den ersten Dehydrierungsschritt der β‑Oxidation kurzkettiger Fettsäure‑Acyl‑CoAs katalysiert und damit den Fettsäureabbau während Fasten und metabolischem Stress mit der Energiegewinnung verknüpft. Durch die Übertragung von Elektronen auf das Elektronenübertragungs‑Flavoprotein‑System (ETF) und nachgeschaltete Komponenten der Atmungskette trägt ACADS zur mitochondrialen Redoxhomöostase und zu einem effizienten Durchsatz in den Fettsäureoxidationswegen bei. Eine veränderte ACADS‑Funktion ist mit einer gestörten Oxidation kurzkettiger Fettsäuren, metabolischer Azidose und neuromuskulären Symptomen assoziiert, wie sie bei der Dehydrogenase‑Defizienz für kurzkettige Acyl‑CoAs (SCAD‑Mangel) beobachtet werden, und ist daher für Studien zu angeborenen Stoffwechselstörungen relevant. ACADS stellt zudem einen nützlichen Ansatzpunkt dar, um mitochondrialen Stoffwechsel, Reaktionen auf oxidativen Stress und lipidvermittelte Signalwege in humanen Zellen zu untersuchen.
ACADS Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACADS-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACADS abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACADS-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACADS-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.