Plásmido CRISPR de Activación (h) ABP1: sc-410674-ACT

El AOC1 humano codifica la amina oxidasa 1 que contiene cobre (también conocida como ABP1/DAO), una enzima secretada y asociada a membrana que cataliza la desaminación oxidativa de aminas biógenas como la histamina y la putrescina, produciendo aldehídos, amoníaco y peróxido de hidrógeno. Mediante la regulación del tono de aminas extracelulares y la generación de especies reactivas de oxígeno, AOC1 influye en la señalización inflamatoria, la biología de la barrera epitelial y las vías sensibles al estado redox en el microambiente tisular. La actividad o expresión alteradas de AOC1 se han vinculado con una desregulación del metabolismo de la histamina y de las respuestas inmunitarias, y se han investigado en contextos como la inflamación asociada a alergias, la función de la mucosa gastrointestinal y la biología del estroma asociado a tumores. Estas propiedades hacen de AOC1 una diana útil para estudios mecanísticos del catabolismo de aminas, el estrés oxidativo y la señalización célula–célula mediada por metabolitos extracelulares.

ABP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AOC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ABP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AOC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AOC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ABP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AOC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ABP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ABP1 en células tumorales con expresión de AOC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.