Plasmide CRISPR d'Activation (m) ABCG8: sc-426583-ACT

Abcg8 chez la souris code le transporteur ABCG8 de la famille des cassettes de liaison à l’ATP (ABC), partenaire hétérodimérique obligatoire d’ABCG5, qui assure l’efflux des stérols à travers les membranes apicales. Dans les hépatocytes et les entérocytes, le complexe ABCG5/ABCG8 limite l’absorption intestinale et favorise la sécrétion biliaire du cholestérol et des stérols d’origine végétale, en s’intégrant aux réseaux de prise en charge des lipides régulés par la signalisation LXR et le transport entérohépatique. L’activité d’ABCG8 influence l’homéostasie stérolique systémique, et son dérèglement est associé à des modifications des profils lipidiques plasmatiques ainsi qu’à des phénotypes d’accumulation de stérols. Par conséquent, Abcg8 est largement étudié dans les voies reliant le transport intestinal, la sécrétion hépatobiliaire et les mécanismes des maladies métaboliques.

ABCG8 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Abcg8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ABCG8 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Abcg8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Abcg8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ABCG8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Abcg8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ABCG8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ABCG8 dans les cellules tumorales présentant une expression de Abcg8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.